20 de Septiembre de 2018
Artículo con referato

Análisis de segregación de ssr polimórficos en tres poblaciones f2 de Maní para tolerancia a carbón

XXXIII Jornada Nacional del Maní. El carbón de maní (Thecaphora frezii) está distribuido en toda el área productiva de Córdoba incrementando su intensidad en las sucesivas campañas agrícolas. Se han encontrado cultivares de maní tolerantes a este patógeno pero hasta el momento no hay estudios que aborden la estructura genética del carácter.

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Autores
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Federico MINUDRI
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Guillermo PEIRETTI
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Mercedes IBAÑEZ
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Juan Andrés PAREDES

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La construcción de poblaciones segregantes a partir de parentales con comportamiento extremo frente a la enfermedad, sirven como base en el desarrollo de diversas herramientas moleculares que asistan al mejoramiento. Para establecer protocolos de introgresión de la resistencia asistida por marcadores tanto en los materiales nuevos como en los cultivares elite ya existentes, es clave la identificación de regiones genómicas (QTL) asociadas a la misma. Este trabajo propone un análisis preliminar de tres poblaciones F2 de maní derivadas de padres contrastantes para el carácter tolerancia a carbón. Se plantearon como objetivos: 1) determinar la independencia en la distribución y la recombinación de los alelos parentales y 2) analizar la segregación fenotípica del carácter en estudio.

Materiales y Métodos

La evaluación fenotípica se realizó en un diseño completamente aleatorizado utilizando cuatro parentales (tres tolerantes y uno susceptible) como testigos. En invernadero se sembraron 20 individuos F2 de cada una de las tres poblaciones segregantes (A, B y C). Posterior a la emergencia se agregó en la superficie de cada maceta una suspensión de teliosporas de T. frezii compuesta por 0,5 g de teliosporas en 200 ml de agua, generando una densidad de inóculo superior a 10.000 teliosporas/g de suelo. La variable evaluada fue Incidencia (INC), la comparación entre los parentales fue realizada mediante un modelo lineal mixto generalizado (InfoStat) y los histogramas para cada población fueron construidos con los porcentajes ajustados sobre los testigos. Para el análisis de marcadores, se tomaron muestras de hojas frescas que fueron sometidas a extracción de ADN genómico mediante el protocolo de CTAB de Doyle y Doyle con modificaciones ajustadas en el laboratorio. La cantidad e integridad del ADN extraído se corroboró en geles de agarosa al 0,8% p/v y se cuantificó mediante el uso de un fluorómetro. Nueve SSR polimórficos se amplificaron para la población A y 10 para las poblaciones B y C con condiciones de PCR ajustadas en trabajos previos. Los productos obtenidos fueron visualizados por electroforesis en gel de poliacrilamida el 6% p/v y coloreados con tinción de nitrato de plata. Con el fin de determinar si los SSR presentaban la segregación mendeliana esperada (1:2:1) en las poblaciones F2 se utilizó el programa MapDisto 1.7.7. Se consideraron marcadores con segregación mendeliana aquellos que presentaron valores de X2X2 crítico(5,991) para un nivel de significancia α=0,05.

Resultados y Discusión

En la comparación de los parentales para la variable INC se rechazaron todas las hipótesis de normalidad. El modelo lineal generalizado que mejor se ajustó sobre los datos observados correspondió a una distribución binomial, con función de enlace logit, tomando los parentales como efecto fijo y la repetición como efecto aleatorio. La prueba de hipótesis resultó significativa (p= 0,0004). Los histogramas de frecuencias de las poblaciones F2 mostraron distribuciones asimétricas que serán evaluadas con los modelos correspondientes. En relación a los marcadores, se observó que para la población B no hubo distorsión de la segregación mendeliana esperada 1:2:1. Mientras que para la población A de los nueve SSR analizados sólo uno (SEQ15F12) evidenció distorsión (X2=26,40; p=0,00) hacia el alelo del parental tolerante. Por su parte, en la población C, de los 10 SSR analizados dos de ellos (TC25G11 y TC38F01) evidenciaron distorsión de la segregación (X2=13,50; p=0,00117 y X2=7,12; p=0,02847; respectivamente) hacia el alelo del parental susceptible.

Por todo lo expuesto se concluye que los cruzamientos fueron exitosos en la obtención de poblaciones F2 con combinaciones alélicas en las proporciones esperada. Dado que la distribución de la variable INC no fue continua, se deberá contemplar poblaciones mayores a 300 genotipos para una correcta comprensión de la estructura genética del carácter.

INTA-EEA Manfredi. -Instituto de Genética, CNIA-INTA. _FAV, UNRC. _IPAVE, CIAP-INTA.

Referencias

Áreas geográficas alcanzadas
    • Argentina
    • Córdoba
    • General Cabrera